Cromatografía de lípidos

Cromatografía de lípidos



OBJETIVO.

Objetivo didáctico.
Practicar la cromatografía como método para separación de lípidos.

Objetivo experimental. Realizar la cromatografía en papel de muestras biológicas para separar los lípidos presentes.

INTRODUCCION.
Cromatografía.
La cromatografía es un método que consiste en la separación de una sustancia por medio de su solubilidad en un solvente puro o mezcla de solventes, que depende de las propiedades fisicoquímicas de las moléculas involucradas.
Se pueden obtener los valores de Rf del soluto que se esté desplazando, al calcular el porcentaje de desplazamiento respecto al la distancia alcanzada por el solvente. Los valores de Rf son específicos para cada compuesto con el mismo solvente o eluyente.


MATERIALES Y EQUIPOS.

___1 atomizador.
___1 cámara de cromatografía de 7 x 20 cm.
___1 mortero con mano.
___1 papel Whatman No. 1 para cromatografía
___5 tubos de ensayo de 10 X100.
___5 tubos capilares.

REACTIVOS Y SUSTANCIAS.

___Acetona.
___Benceno.
___Etanol.
___Solución de benceno/etanol (2:1).
___Solución de anilino naftalén sulfónico (ANS).
___Muestra de tejido animal o vegetal.

PROCEDIMIENTO.

Equipo de protección.
Ojos.
___Anteojos de policarbonato o monogógles incoloros.
___*Anteojos de policarbonato o monogógles de color ámbar.

Piel.
___Guantes de nitrilo para solventes.
___Ropa de algodón.

Respiratorio.
___Respirador con filtro para solventes (Código gris).
___Maneje los solventes en campana para vapores.
___No respire los vapores.

Precauciones especiales.
___Baño de ojos disponible.
___Regadera de seguridad disponible.
___Extinguidor de polvo químico, CO2 o gas halón (Tipo ABC).
___Lave abundantemente después de usar los reactivos.

Experimento.
___Colóquese ropa de algodón para protección (bata).
___Revise que las llaves de gas estén cerradas.
___Revise que las llaves de agua estén cerradas.
___Revise que las llaves de aire comprimido estén cerradas.
___Revise que los contactos eléctricos estén libres.
___Revise que los interruptores de luz del laboratorio estén encendidos.
___Revise que los extractores de aire estén encendidos.
Preparación de soluciones.
___Revise que la Acetona esté en la campana.
___Revise que el benceno esté en la campana.
___Revise que el etanol esté en la campana.
___Revise que el Agua destilada esté sobre la mesa.
___Colóquese los guantes de nitrilo.
___Lave el material con agua corriente y detergente.
___Enjuague el material con agua destilada.
___Seque el material con franela o con papel absorbente.
___Enjuague el material con etanol.
___Seque los guantes de neopreno con franela o con papel absorbente.
___Colóquese anteojos de policarbonato o monogógles incoloros.
___Coloque un espejo de 1 cm de espesor mezcla de solventes en la cámara.
___Tape la cámara de cromatografía para que se sature.
___Coloque el papel Whatman lo sobre papel envoltura.
___Limpie la regla con que va a marcar.
___En el papel Whatman marque con lápiz una línea a 2 cm del borde
___Marque puntos equidistantes de acuerdo con el número de muestras.
___Macere 1 g de tejido (vegetal o animal) con 20 ml de solvente.
___Filtre la mezcla.
___Con un capilar aplique gota a gota la solución en el punto correspondiente
___Seque en cada aplicación con la pistola de aire.
___Coloque la hoja dentro de la cámara.
___Tape la cámara.
___Deje correr hasta que el solvente haya ascendido unos a 1 cm del borde superior.
___Saque el papel y se deje secar al aire completamente.
___Revele las muestras a contraluz; iluminando con UV* o rociando con ANS.
___Marque con lápiz cada una de las posiciones
___Determine el Rf de cada uno.
___Identifique los componentes de las muestras.
Forma de desechar
___Deseche los residuos orgánicos(ver Forma de desechar).
___Lave y enjuague el material.
___Seque el material con papel o con franela.
___Guarde y entregue el material y los equipos.
___Revise que no haya reactivos en la campana.
___Apague la campana de extracción.
___Revise que no haya reactivos sobre la mesa.
___Revise que la mesa esté limpia y seca.
___Revise que las llaves de gas estén cerradas.
___Revise que las llaves de agua estén cerradas.
___Revise que las llaves de aire comprimido estén cerradas.
___Revise que los contactos eléctricos estén libres.
___Revise que los extractores de aire estén apagados.
___Revise que los interruptores eléctricos del laboratorio estén apagados.
___Retírese el equipo de protección personal.
___Guarde el equipo de protección personal.
___Revise que la luz del laboratorio esté apagada.

Forma de desechar.
___Queme los residuos orgánicos en un incinerador con filtro y trampa.

OBSERVACIONES.
Mida la distancia que recorrió el solvente en la cromatografía en papel y la distancia que recorre cada muestra tomando desde el punto de aplicación hasta el centro de la mancha.
Calcule el Rf de cada una de las manchas problema. Identifique su problema.
Clasifique a los lípidos encontrados en órden decreciente de polaridad.

REFERENCIAS.
Leray, C. 2000. CYBERLIPID CENTER. http://go.to/cyberlipid.
Plumer, D. T Introducción a la Bioquímica Práctica. Mc Graw Hill, 1981, pág. 58-70

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© Raúl Alva*, México, 5/III/2001.
*Profesor-Investigador de la Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa, México.