Determinación y análisis de carbohidratos

Determinación y análisis de carbohidratos



OBJETIVO.

Objetivo didáctico.
Aprender a medir azúcares disacáridos en solución acuosa.

Objetivo experimental. Medir la absorbencia de disacáridos por el método de fenol/ácido sulfúrico para cuantificar la concentración de disacáridos en muestras acuosas.

INTRODUCCION.

MATERIALES Y EQUIPOS.

___Botella lavadora 1
___Celdas de vidrio 2
___Espátula 1
___Espectrofotómetro 1
___Gradilla 1
___Matraz volumétrico de 10 ml 1
___Mezcladora 1
___Parrilla piromagnética 1
___Pipetas Pasteur con bulbo 2
___Pipeta serológica de 1 ml 1
___Pipetas serológicas de 5 ml 2
___Pipeta serológica de 25 ml 1
___Probeta de 50 ml 1
___Probeta de 100 ml 1
___Propipeta 1
___Termómetro -10 a 200 °C 1
___Tubos de ensaye 20
___Varilla de vidrio 1
___Vasos de precipitado de 50 ml 2
___Vaso de precipitados de 125 ml 1
___Vaso de precipitados de 250 ml 1

REACTIVOS, SUSTANCIAS Y MATERIAL BIOLÓGICO.

___Acido sulfúrico concentrado (H2SO4), 100 ml.
___Azúcar disacárida C12H20O11 (p.ej. sacarosa), 10 ml, 0.06 M.
___Fenol, 25 ml, 5% en agua.
___Muestra líquida problema con azúcares (PROPORCIONADA POR LOS ALUMNOS)

PROCEDIMIENTO.

Equipo de protección.
Ojos.
Anteojos de policarbonato o monogógles.

Piel.
Guantes de neopreno.
Ropa de algodón.

Respiratorio.
Respirador con filtro para ácidos (Código amarillo).
Maneje los ácidos y solventes orgánicos en campana para vapores.
No respire los vapores.

Precauciones especiales.
Baño de ojos disponible.
Regadera de seguridad disponible.
Extinguidor de polvo químico, CO2 o gas halón (Tipo ABC).
Lave abundantemente después de usar los reactivos.

Experimento.
___Colóquese ropa de algodón para protección (bata).
___Revise que las llaves de gas estén cerradas.
___Revise que las llaves de agua estén cerradas.
___Revise que las llaves de aire comprimido estén cerradas.
___Revise que los contactos eléctricos estén libres.
___Revise que los interruptores de luz del laboratorio estén encendidos.
___Revise que los extractores de aire estén encendidos.
___Revise que el Agua destilada esté sobre la mesa.
___Revise que el azúcar esté sobre la mesa.
___Revise que el Bicarbonato de sodio esté sobre la mesa.
___Revise que el ácido sulfúrico concentrado esté en la campana.
___Revise que el fenol esté sobre la mesa.
Preparación de soluciones.
___Colóquese anteojos de policarbonato o monogógles sin ventilación.
___Colóquese los guantes de neopreno.
___Tome un vaso de precipitados de 100 ml.
___Etiquete el vaso de 100 ml con el nombre bicarbonato 10 %.
___Ajuste la balanza a 0.0 g.
___Coloque el vaso bicarbonato 10 % sobre la balanza.
___Tare el vaso bicarbonato 10 %.
___Destape el frasco de bicarbonato de sodio.
___Tome un espátula.
___Pese 10 g de bicarbonato de sodio en el vaso bicarbonato 10 %.
___Tape el frasco de bicarbonato de sodio.
___Limpie el espátula.
___Conecte la parrilla magnética.
___Coloque el vaso bicarbonato 10 % sobre la parrilla magnética.
___Introduzca el agitador magnético en el vaso bicarbonato 10 %.
___Con la probeta graduada mida 90 ml de agua destilada.
___Agregue los 90 ml de agua destilada al vaso bicarbonato 10 %.
___Agite vigorosamente para homogeneizar el bicarbonato de sodio.
___Apague la parrilla magnética.
___Con el espátula retire el agitador del vaso bicarbonato 10 %.
___Enjuague el espátula y el agitador magnético con agua destilada.
___Seque el espátula y el agitador magnético.
___Colóquese el respirador.
___Encienda la campana de extracción.

___Mida 100 ml de ácido sulfúrico.
___Se preparan 10 ml de solución de azúcar, 0.06 M.
___Se preparan 25 ml de fenol al 5%.
___Si la muestra problema es rica en azúcar, haga una dilución 1/10.
Curva de calibración y medición azúcar en las muestras.
___Se toman 20 tubos de ensayo.
___Se numeran los tubos en dos series del 1 al 10.
___En los tubos agregue los reactivos en el orden de la siguiente tabla.



___Se agitan los tubos vigorosamente.
___Se dejan reposar 10 min a temperatura ambiente.
___Se agitan nuevamente y se dejan reposar 20 min a 30 °C.
___En el espectrofotómetro se mide la absorbencia a 490 nm
Forma de desechar
___Neutralice lentamente los residuos ácidos (ver Forma de desechar).
___Deseche los residuos ácidos (ver Forma de desechar).
___Deseche los residuos orgánicos(ver Forma de desechar).
___Lave y enjuague el material.
___Seque el material con papel o con franela.
___Guarde y entregue el material y los equipos.
___Revise que no haya reactivos en la campana.
___Apague la campana de extracción.
___Revise que no haya reactivos sobre la mesa.
___Revise que la mesa esté limpia y seca.
___Revise que las llaves de gas estén cerradas.
___Revise que las llaves de agua estén cerradas.
___Revise que las llaves de aire comprimido estén cerradas.
___Revise que los contactos eléctricos estén libres.
___Revise que los extractores de aire estén apagados.
___Revise que los interruptores eléctricos del laboratorio estén apagados.
___Retírese el equipo de protección personal.
___Guarde el equipo de protección personal.
___Revise que la luz del laboratorio esté apagada.

Forma de desechar.
___Neutralice los residuos ácidos con bicarbonato de sodio. Deseche.

OBSERVACIONES
___Grafique la cuva de calibración de A490 nm vs [azúcar] M.
___Calcule la concentración de azúcar [azúcar] medida en cada muestra problema.

REFERENCIAS.
Lehninger, A.L. 1975. Biochemistry.2nd ed. Worth Publ. Co., New York.
Plumer, D.T. 1981. Introducción a la Bioquímica Práctica. Mc Graw Hill.
Rendina, G. 1974. Técnicas de Bioquímica Aplicada. Editorial lnteramerícana.
Cole-Parmer 97-98. Cole-Parmer Instrument Company, Vernon Hills, IL. 1996.
Hackett, W.J. y Robbins, G.P. 1982. Manual Técnico de Seguridad. Representaciones y Servicios de Ingeniería, S.A., México.
The Merk Catalogue. Merk KgaA, Darmstadt, BRD. 1996.
The Merk Index. 12th ed. Merk KgaA, Darmstadt, BRD. 1996.
Linder, P.W. y col. 1976. J. Chem. Educ. 53,330-332.
Van Holde, K.E. 1971. Physical Chemistry. Prentice Hall, Englewood Cliffs, N.J.
Tanford, C. 1961. Physical Chemistry of Macromolecules. John Wiley & Sons, New York, N.Y.
Tinoco, I. y col. 1978. Physical Chemistry. Prentice Hall, Englewood Cliffs, N.J.

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© Raúl Alva*, México, 5/III/2001.
*Profesor-Investigador de la Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa, México.